瀘州PCR技術(shù)在基層疾控中心實驗室的應(yīng)用案例
admin 2020-07-23 05:07:53 閱讀
1 方法
1.1 吳忠市疾控中心申請建立PCR實驗室。
吳忠市PCR實驗室的建立有其歷史必要性。的5月，還沒有特效治療的藥物，尚無有效的預(yù)防疫苗，相關(guān)的疫苗研發(fā)正在進(jìn)行之中[2]。甲型H1N1流感疫情的蔓延和流行趨勢，引起全球人民的高度恐慌。我國密切關(guān)注甲型H1N1流感的發(fā)生和傳播，各級疾控中心加強(qiáng)監(jiān)測和檢測，及時應(yīng)對疫情的發(fā)生。面對可能（maybe)大規(guī)模爆發(fā)的流感疫情，我們的實驗室檢測工作已經(jīng)無法解決對疫情病毒的確診工作，無法滿足這種空前危機(jī)的局勢,擴(kuò)大流感檢測實驗室，應(yīng)對疫情危機(jī)已經(jīng)是迫在眉睫的問題。實驗室檢測是確診流感病例的重要依據(jù)，為進(jìn)一步加強(qiáng)疫情監(jiān)測，嚴(yán)防疫情擴(kuò)散，需逐步將現(xiàn)有流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室擴(kuò)大到所有地市級疾病預(yù)防控制（control)中心，因此建立基層PCR實驗室是這種歷史時期的必然趨勢。
PCR實驗室是分子生物實驗室，因其技術(shù)參數(shù)條件高，造價昂貴，開展工作耗資巨大，因此很難在基層實驗室建立。，在特定的歷史時期，寧夏吳忠市疾控中心積極向上級部門和地方政府匯報建立PCR實驗室的必要性，并申請項目資金，申請審批在吳忠市疾控中心建立PCR實驗室。
1.2 RT-PCR技術(shù)和Real-time PCR技術(shù)在基層疾控中心實驗（experiment)室的運用。大學(xué)實驗室國家科技創(chuàng)新體系的重要組成部分，高等學(xué)校創(chuàng)新性人才的培養(yǎng)基地，在高校學(xué)科建設(shè)、科技創(chuàng)新、人才培養(yǎng)和培育國家級科研基地中發(fā)揮著越來越重要的作用。
寧夏吳忠市PCR實驗（experiment)室按照標(biāo)準(zhǔn)配置了普通PCR擴(kuò)增儀、定量Real-time實時熒光PCR儀、電泳儀、凝膠(gelate)成像儀、倒置顯微鏡、A2型生物安全柜、B2型生物安全柜、超凈工作臺、低溫冷凍離心機(jī)、培養(yǎng)箱、高壓鍋、-70攝氏度低溫冷凍冰箱、純水儀等儀器設(shè)備30余件。動物實驗室通過對動物本身生命現(xiàn)象的研究，進(jìn)而推用到人類，探索人類的生命奧秘，控制人類的疾病和衰老，延長人類的壽命。隨著醫(yī)學(xué)生物科學(xué)的突飛猛進(jìn)發(fā)展，認(rèn)識到公害問題不僅已成為糧食、人口、老年人等的重大社會問題，而且還涉及到地球上生活著的動物生存問題。
在PCR實驗（experiment)室建設(shè)同時，吳忠市疾控中心先后派出2名專業(yè)技術(shù)人員到寧夏自治區(qū)疾控中心病毒實驗室進(jìn)行了專項培訓(xùn)（作用:知識傳遞、技能傳遞、標(biāo)準(zhǔn)傳遞)，通過考核，獲得了上崗證書。
11月22日，經(jīng)過寧夏回族自治區(qū)疾控中心專家的現(xiàn)場流感樣盲樣的考核驗收，達(dá)標(biāo)后以RT-PCR技術(shù)開展流感核酸檢測工作開始正式投入使用，標(biāo)志著PCR技術(shù)首次在基層實驗室的開展。
2 結(jié)果
2.1 在國家和地方政府的大力支持下，在單位領(lǐng)導(dǎo)的努力和各位專家的指導(dǎo)下，吳忠市PCR實驗室于同年11月份建成。
寧夏吳忠市PCR實驗室嚴(yán)格按照生物安全Ⅱ級的要求在市疾控中心進(jìn)行設(shè)計和建設(shè)。 PCR技術(shù)基本原理就是將感樣本的特異基因組核酸基因片段通過聚集、提取、擴(kuò)增，分析其擴(kuò)增產(chǎn)物來確定流感病毒的類型。完成一組PCR實驗，通常應(yīng)經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析四個實驗過程[3]。
寧夏吳忠市疾控中心的PCR實驗室在環(huán)境結(jié)構(gòu)上是組合形式的PCR實驗室，是指完成PCR四個實驗過程的實驗和用房是相鄰布置的，組成獨立實驗區(qū)域的形式。實驗室設(shè)有PCR內(nèi)部專用走廊。實驗室間有試劑配制室、樣品處理室、核酸擴(kuò)增室及核酸擴(kuò)增產(chǎn)物分析(Analyse)室組成。各室在入口處設(shè)置有緩沖間，以減少室內(nèi)外空氣交換。我中心的PCR實驗室是通過獨立的送排風(fēng)系統(tǒng)，控制（control)氣流方向和壓差，氣流由清潔區(qū)流向污染區(qū) 。
2.2 目前，吳忠市PCR實驗室運用RT-PCR技術(shù)和Real-time PCR技術(shù)承擔(dān)來自哨點醫(yī)院（吳忠市人民醫(yī)院）的發(fā)熱病人的流感樣樣本的常規(guī)檢測，同時還擔(dān)負(fù)著整個吳忠市轄區(qū)暴發(fā)集體發(fā)熱疫情的現(xiàn)場快速檢測及實驗室確診檢測工作，確診流感病毒類型及分型。運用Real-time PCR技術(shù)和雙重Real-time PCR技術(shù)對本手足口病樣核酸鑒定和分型。對流感樣和手足口病樣核酸檢測，吳忠市PCR實驗室檢測的陽性樣品，全部都及時送到寧夏回族自治區(qū)疾控中心病毒科實驗室復(fù)核（審查核對)，結(jié)果一致，沒有出現(xiàn)結(jié)果異?；蛘呤遣环锨闆r。國家流感中心在10月和10月，兩次組織對國家流感網(wǎng)絡(luò)絡(luò)實驗室分別進(jìn)行為數(shù)10份的流感盲樣標(biāo)本分型考核，盲樣考核樣品由國家流感中心統(tǒng)一提供。吳忠市疾控中心流感網(wǎng)絡(luò)實驗室的考核盲樣結(jié)果符合率均為100%，順利通過，這是對工作人員盡快掌握RT-PCR技術(shù)和Real-time PCR技術(shù)的肯定。吳忠市PCR實驗室自建成開展工作以來，無安全事故發(fā)生，沒有檢測結(jié)果錯誤情況，一切運轉(zhuǎn)正常。
3 結(jié)論：
3.1 吳忠市PCR實驗（experiment)室運用RT-PCR技術(shù)和Real-time PCR技術(shù)檢測包括甲型H1N1流感在內(nèi)的各種流感病毒核酸，及時確診流感病毒的類型及其亞型，為流感疫情的流行水平和變化趨勢(variation tendency)提供科學(xué)有效的數(shù)據(jù)，為提高我市的疾病防控工作能力提供了技術(shù)支撐?；瘜W(xué)實驗室人們利用它們來探索學(xué)習(xí)物質(zhì)及其變化的奧秘。進(jìn)入化學(xué)實驗室之前一定要仔細(xì)閱讀實驗室規(guī)則，嚴(yán)格按照規(guī)則操作。因為很多的化學(xué)藥品對人體的危害性非常大，對環(huán)境也有較大污染。
3.2 在吳忠市PCR實驗（experiment)室運用熒光定量PCR技術(shù)和雙重?zé)晒舛縋CR技術(shù)檢測手足口病核酸分型，暴發(fā)疫情快速確診腸道病毒類型，掌握EV71和CoxA16感染流行（Prevalent)特征，為疫情的流行水平和變化趨勢提供科學(xué)有效的數(shù)據(jù)，同時為臨床診斷以及制定預(yù)防措施提供依據(jù)。
3.3 吳忠市PCR實驗室，作為一個分子診斷實驗室，能夠為將來開展PCR技術(shù)支持的任何其它病毒核酸檢測提供實驗環(huán)境，在今后的發(fā)展中將會發(fā)揮其最大效應(yīng)，也許在不久的將來，丙肝病毒、艾滋病毒、乙腦病毒、輪狀病毒、流感病毒、麻疹(measles)病毒、腺病毒、EB病毒、風(fēng)疹病毒等需要PCR技術(shù)支持病毒核酸檢測都能夠在吳忠市疾控中心這樣的基層PCR實驗室完成。PCR技術(shù)在吳忠市疾控中心實驗室的運用，提高了實驗室的技術(shù)能力，也為分子生物學(xué)在基層實驗室開展研究奠定基礎(chǔ)。。
寧夏吳忠市PCR實驗室的建成啟用，極大地提高了我市流感傳染病和手足口病診斷的及時性和準(zhǔn)確性，對有效預(yù)防控制流感病毒和手足口病傳染病發(fā)揮重要的指導(dǎo)性作用。RT-PCR技術(shù)和Real-time PCR技術(shù)在基層疾控中心實驗室的運用，吳忠市疾控中心實驗室首次具備核酸檢測能力，提高了基層實驗室的技術(shù)能力，為流行（Prevalent)病疫情的流行水平和變化趨勢提供科學(xué)有效的數(shù)據(jù)，為我市的疾病防控工作能力提供了技術(shù)支撐，也為分子生物學(xué)在基層實驗室開展研究奠定基礎(chǔ)。建立基層PCR實驗室不盡是基層實驗室能力建設(shè)的一個巨大飛躍，更是在現(xiàn)代疾病預(yù)防控制事業(yè)中起到了巨大的作用。
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